细胞生物学平台

ROS是什么？

ROS也就是活性氧（reactive oxygen species，ROS）指来源于氧的自由基和非自由基。ROS在细胞生命，应激和死亡中具介导作用，并且不同浓度的ROS在其中起着截然不同的作用，从而导致细胞命运的不同。因此对ROS的浓度或相对水平进行可靠的测量非常有必要。

实验仪器和材料

细胞培养基

胎牛血清

青霉素/链霉素

胰酶

PBS

DMSO

活性氧（ROS）试剂盒

血球计数板

CO2培养箱

倒置荧光显微镜

实验步骤

1、细胞传代培养：当细胞长至80-90%时，去除培养基，加入PBS洗1-2次，去除PBS后，加入1ml胰酶消化1-3min后，加入3ml完全培养基中和胰酶终止消化，将消化的细胞转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min。倒掉上清后，加入3ml培养基重悬细胞，1:3传代至培养皿中培养。

2、将长到培养皿80%-90%的内皮细胞用胰酶消化下来，1000rpm离心，去除上清，加入完全培养基重悬细胞，将细胞分别种在6孔板中，每孔种1×106个细胞。

3、待细胞贴壁后，使用不同的含药血清的培养基培养细胞。

4、48h后，加入DCFH-DA于培养基中，稀释倍数为1:1000。

5、孵育1h后，直接将细胞置于荧光显微镜下拍照。

实验结果