样本准备、包装、保存和运输指南
1 样本准备应该遵循的基本原则
1.1 代表性原则
取样的代表性关系到实验结果是否具有科学意义，因此您应该根据实验目的慎重选择您的取样方案。病变组织样本中应不夹带正常组织，正常组织样本中不能含有病变组织。有条件时，应做到实验组与对照组的样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致，否则可能会影响实验结果的可信度。
1.2 准确性原则
代表性样本的各种特征数据必须被准确记录，并按要求（低温、迅速）采集、制备、贮存、运输，最终正确地按实验设计进行实验和数据处理。
1.3 迅速性原则
样本质量是实验中影响实验结果的最关键因素，因此样本在采集、制备、贮存、
运输过程中应尽可能地做到迅速，最大限度的缩短从样本采集到实验的时间。
1.4 低温原则
所取样本离体后，应尽快置于液氮、干冰或-80℃冰箱中，并保证在实验前始
终处于-70℃以下，以避免DNA/RNA的降解。
2 样本准备的方法
2.1 贴壁细胞
2.1.1RNA
2.1.1.1 贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；
2.1.1.2 加入适量的PBS缓冲液冲洗一次，彻底去除PBS缓冲液
2.1.1.3 按每10 cm2 （相当于六孔板一个孔或35mm直径培养皿）细胞加
1mL TRIzol 试剂的比例加入TRIzol 试剂；
2.1.1.4 使用玻璃滴管（或移液器Tip头）反复吹打细胞，直至看不见成团的
细胞块，使之充分溶解于TRIzol 中形成清亮不粘稠的液体；
2.1.1.5 将TRIzol液体全部转移到RNase-free 的试管中
2.1.1.6 放入-80℃冰箱中保存。
2.1.2miRNA
2.1.2.1 贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；
2.1.2.2 加入适量的PBS缓冲液冲洗一次，彻底去除PBS缓冲液；
2.1.2.3 按每105-107的细胞加入600μl Lysis/Binding Solution（我公司可免
费提供）；
2.1.2.4 使用移液器Tip头反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之充
分溶解于裂解液中形成清亮不粘稠的液体；
2.1.2.5 将液体全部转移到RNase-free 的试管中；
2.1.2.6 放入-80℃冰箱中保存。
2.1.3 DNA
2.1.3.1 胰酶消化并收集约1-4×106细胞（60mm培养皿或T25培养瓶），转
移到1.5ml离心管中；
2.1.3.2 3000rpm离心5min，去胰酶；
2.1.3.3 PBS轻轻吹打清洗一次。 3000rpm离心5min，去上清；
2.1.3.4 放入-80℃冰箱中保存。
2.1.4蛋白
2.1.4.1 贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；
2.1.4.2 加入适量的PBS缓冲液冲洗一次，彻底去除PBS缓冲液
2.1.4.3 按六孔板一个孔或35mm直径培养皿细胞加200µL TRIzol 试剂的比例加入RIPA 试剂；
2.1.4.4 使用玻璃滴管（或移液器Tip头）反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于RIPA中形成清亮不粘稠的液体；
2.1.4.5 将液体全部转移到离心管中；
2.1.4.6 放入-80℃冰箱中保存。
2.2 悬浮细胞
2.2.1RNA
2.2.1.1 悬浮细胞培养诱导结束后，去除培养液；
2.2.1.2 保留的细胞用PBS 缓冲液快速洗一次，离心除去PBS 缓冲液；
2.2.1.3 按照每5×106 个细胞加1 mL TRIzol 的比例加入TRIzol 试剂，使用
玻璃滴管（或移液器Tip头）反复吹打细胞直至看不见成团的细胞
块，使之充分溶解于TRIzol 中形成清亮不粘稠的液体；
2.2.1.4 放入-80℃冰箱中保存。
2.2.2miRNA
2.2.2.1 悬浮细胞培养诱导结束后，去除培养液；
2.2.2.2 保留的细胞用PBS 缓冲液快速洗一次，离心除去PBS 缓冲液；
2.2.2.3 按照每105-107的细胞加入600μl Lysis/Binding Solution（我公司可免费提供）；
2.2.2.4 使用移液器Tip头反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于裂解液中形成清亮不粘稠的液体；
2.2.2.5 将液体全部转移到RNase-free 的试管中；
2.2.2.6 放入-80℃冰箱中保存。
2.2.3DNA
2.2.3.1 收集约1-4×106细胞（60mm培养皿或T25培养瓶），转移到1.5ml离心管中；
2.2.3.2 3000rpm离心5min；
2.2.3.3 PBS轻轻吹打清洗一次。 3000rpm离心5min，去上清；
2.2.3.4 放入-80℃冰箱中保存。
2.2.4蛋白
2.2.4.1 贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；
2.2.4.2 加入适量的PBS缓冲液冲洗一次，彻底去除PBS缓冲液
2.2.4.3 按六孔板一个孔或35mm直径培养皿细胞加200µL TRIzol 试剂的比例加入RIPA 试剂；
2.2.4.4 使用玻璃滴管（或移液器Tip头）反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于RIPA中形成清亮不粘稠的液体；
2.2.4.5 将液体全部转移到离心管中；
2.2.4.6 放入-80℃冰箱中保存。
2.3 全血
2.3.1RNA
2.3.1.1 抽提RNA建议采用BD的PAXgene管抽取全血。使用淋巴细胞分离液或红细胞裂解液会使活细胞处于应激状态，从而影响细胞的基因表达；
2.3.1.2 PAXgene管抽取全血；
2.3.1.3 采血以后，颠倒混匀8-10次；
2.3.1.4 4℃放置过夜后转入-20℃或-80℃冰箱中保存。
2.3.2 DNA
2.3.2.1 用EDTA抗凝管抽取1-2ml全血；
2.3.2.2 颠倒混匀抗凝管8-10次，充分混匀EDTA和全血，保证抗凝效果；
2.3.2.3 放入-20℃冰箱中保存。
2.4 血浆
2.4.1 采集外周血2mL，迅速转入EDTA抗凝管中，涡旋或用移液器Tip混匀；
2.4.2 在1小时（室温条件下）或2小时(4℃条件下)内进行下面的操作： 4℃，820g（9,400rpm）离心10分钟；
2.4.3 吸约1mL上清转至洁净的1.5 mL离心管中，16,000g (13,200rpm),4℃,离心10分钟，小心吸取上清到新的离心管中；
2.4.4 放入-80℃冰箱中保存。
2.5血清
2.5.1采集外周血2mL，迅速转入促凝管中，涡旋或用移液器Tip混匀；
2.5.2 放入冰箱4℃条件下凝固4h，4℃，3000rpm离心10分钟；
2.5.3 将上清转至洁净的1.5 mL离心管中，16,000g (13,200rpm),4℃,离心10分钟，小心吸取上清到新的离心管中；
2.5.4 放入-80℃冰箱中保存。
2.6 动物组织
2.6.1 RNA， miRNA、 DNA、蛋白和病例检测
2.6.1.1首先准备好用于包装样本冷冻保存管，并且用油性记号笔在冻存管外表多处写明样本编号；
2.6.1.2动物取材时：
病理样本：10%福尔马林的全身灌流，冲出待检测样本中的血液；
电镜样本：用生理盐水全身灌流，冲出待检测样本中的血液；
RNA， miRNA、 DNA、蛋白检测样本：用生理盐水全身灌流，冲出待检测样本中的血液；
准确切除所需组织后，立即剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织。务必将组织分割成小块；
2.6.1.3 在生理盐水或PBS中迅速漂洗样本，以去除血渍和污物；
2.6.1.4 用镊子夹住样本，放入液氮中冷却样本（病理检测的组织需置入4%多聚甲醛固定，电镜样本置于2.5%的戊二醛4℃固定）；
2.6.1.5 放入准备好的保存管中根据实验目的不同条件保存；
2.6.1.6 填写样本登记单，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。
2.7 临床组织标本
2.7.1RNA， miRNA、 DNA、蛋白和病理检测
2.7.1.1 首先准备好用于包装样本冷冻保存管，并且用油性记号笔在冻存管外表多处写明样本编号；
2.7.1.2 准确切除所需组织后，立即剔除非研究所需的组织，并将组织分割成小块；
2.7.1.3 用镊子夹住样本，放入液氮中冷却样本（病理检测的组织需置入4%多聚甲醛固定，电镜样本置于2.5%的戊二醛4℃固定）；
2.7.1.4 放入准备好的保存管中根据实验目的不同条件保存；
2.7.1.5 填写样本登记单，写明样本名称、组织类型、编号、取样日期、样本处理过程等情况。
3 样本包装
3.1 注意事项
3.1.1在包裹样本的铝箔或冷冻保存管表面，用油性记号笔标明样本编号及样本
类型。并且不要与乙醇等有机溶剂接触。
3.1.2不要用纱布、纸张、一次性手套直接包裹样本，而是用铝箔或冷冻保存管包裹后再装入样本袋中。
3.1.3不要用玻璃容器在液氮中保存样本；样本包装中不要使用透明胶带。
3.1.4不要把标签纸或其他纸制的说明性文件放入样本袋内，因为纸张在液氮中
是易碎的。
3.1.5标签纸应该贴于样本袋绳上，不要贴于容器表面以免脱落造成样本混乱。
3.1.6不要在一只样本袋中放过多的样本，以防无法放入液氮罐或无法从液氮罐
中取出。样本袋在使用前先在液氮中预冷。
3.1.7客户在填写《样本登记单》时应当详细描述样本的类型、处理方法、储存条件以及储存时间等相关细节，以便技术人员确定合理的实验方案。
4 样本储存
4.1 样本冷冻储存
4.1.1组织样本采集后，样本迅速放入进口高质量冻存管中，拧紧后立即放入液氮。然后再转移到-80℃中保存。
4.1.2组织样本储存于液氮或-80℃冰箱中。对于液氮保存样本，务必注意， 不要用Eppendorf管和国产冻存管，因为这些管子从液氮中取出时极易发生管子爆裂而造成样本损失。
4.1.3细胞样本经Trizol或RIPA处理后储存于-80℃冰箱中。在-20℃冰箱中储存不宜太久。
4.1.4血液样本建议使用PAXgene管（BD）保存。
4.1.5 RNA样本储存于-80℃冰箱中。
4.1.6 病理检测样本包好的蜡块常温保存；冰冻样本在4%多聚甲醛固定24h，蔗糖梯度脱水（15%，30%），4℃保存运输，最后OCT包埋；电镜样本米粒大1cm3待检测样本2.5%的戊二醛固定，4℃避光保存。
5 样本运输
5.1 干冰运输
5.1.1飞机运输干冰上限约为2公斤，超过2公斤原则上不能运输。火车运输不受限制。
5.1.2干冰运输应采用壁厚且质量完好的泡沫箱，材料用编号后的冻存管存放，
用塑料袋包装后埋入干冰中，泡沫箱应扣严并用封箱带封严。外套纸壳箱包装，以免碰裂。并标明轻取轻放提示，以保证安全运输。
5.1.3干冰运输可委托当地快递公司，注意一定要确保48小时送达我方手中，不
能送货上门的应提前通知我方。
5.1.4 24小时到达的，干冰数量不得低于5公斤； 48小时到达的，干冰数量不
低于8公斤。夏季可以适当再多增加部分干冰（平时的1.5倍）。超过48小时到达的，建议不要用此法运输。
5.1.5运输时可在干冰上再放一排液体冰袋。
5.1.6如委托快递运输，运输过程中应随时跟踪货物的情况，记录货单号，并保持与发出地和接收地的快递公司的联系。
5.2 冰袋（Gel Ice or Ice Pack）
5.2.1如能确保样本在24小时内到达本公司的，以下几种类型样本可使用冰袋运
输。
5.2.2保存于RNAlater中的组织样本。
5.2.3保存于TRIzol中的细胞样本或经过匀浆的组织样本。
5.2.4用于抽提DNA的新鲜抗凝全血样本。
6 注意事项
6.1为确保实验的顺利，我们强烈建议您在取样时，应同时备份2~3份，如备3份，则送给我们两份，如果备份2份，则送样一份，您自己留一份，以防备部分样本降解，重新取材或送样耽误您的时间。即使样本全部合格，备份的样本您还可以用来进行其他方面的实验（如定量验证，蛋白方面，生化方面的实验等）。
6.2备份又分为两种，一种为严格备份，即：样本取下后一分为二，这样的两份样本基本上具备同性质。另一种为非严格备份，即生物学重复的样本，这样的备份样本同质性要较前者差。
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