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改善骨密度功能的动物试验评价方法

1 测试项目:


动物试验:分为方案一(供试物以钙为主)和方案二(其他与骨代谢有关的功能成分,如内分泌调节)不含钙或不依赖钙的供试物有两种方案2仅适用于每日钙摄入量小于100mg的供试品,方案1适用于其他供试品。


1.1 方案一:对幼鼠生产发育的影响


断奶大鼠约4周龄,体重约60-75g,同性别,每组8-12只。适应3-5天后,动物禁食16小时,称重,按体重随机分组,分笼饲养。给动物喂食基础低钙饮食并自由饮水(去离子水以避免饮用水中的钙)。饲养期为4周。 ,每周测量一次体重和体长,记录一周的食物摄入量,计算食物利用率;实验结束时,取双侧股骨,在105℃烘箱中烘烤至恒重,称取骨干重。右侧测量骨钙,左侧测量骨矿物质密度,取股骨或肱骨进行骨病理学检查。


1.2 方案二:对去势性骨质疏松模型大鼠的影响


实验动物为Wistar或SD雌性大鼠,约300g,实验前适应1周。麻醉下进行去势,切除双侧卵巢;选择另一部分大鼠进行类似手术,不切除双侧卵巢,仅切除部分脂肪。术后将大鼠适应性饲养3-5天,然后分组。实验动物按体重随机分组,每组至少10只。测试样品每天给药一次。动物可以自由获取水和基础饲料。喂养期为12周。实验结束时,取大鼠双侧股骨进行测量。测定股骨干重、骨钙含量、骨矿物质密度和骨组织病理学。


1.3 钙吸收代谢实验:


4周龄左右断奶的SD大鼠,体重约60-80克,同性别,每组至少6只。适应3-5天后,将大鼠分别在单独的笼子中饲养4周。每周测量一次长度和重量。用低钙对照组的基础低钙饲料(150mg/100g饲料)配制各剂量的受试物组和碳酸钙对照组。动物随意喂食,每周称量动物食物消耗量以计算食物利用率。动物随意饮用去离子水。实验进行到第四周的前三天,进行钙代谢实验,记录3天的摄食量(g/3d),收集3天的粪便,测定钙含量在饲料和粪便中测定。测定方法采用原子吸收分光光度法测定。


钙摄入量(mg/d)=饲料中钙含量(mg/g)×饲料消耗量(g/d)


粪便钙(mg/d)=粪便中钙含量(mg/d)g)×粪便排泄量(g/d)


钙表观吸收率=(钙摄入量-粪钙)/钙摄入量*100%。


2 实验原理:


2.1 根据被测样品作用原理的不同,可选择方案一和方案二中的一种进行动物试验。


2.2所列指标均为必填项。


2.3 如果样品中含有未经批准用于食品的含钙化合物,必须进行钙吸收和代谢试验;该样本使用了营养强化剂范围内的钙源和来自普通食物(如食用动物的骨头)的钙源。 、牛奶等),可能无法进行钙吸收和代谢测试。


3 结果判断


3.1 方案一:


a) 至少一项生长发育指标(体重、身长、股骨干重)明显高于低钙对照组;


b) 股骨骨钙含量或骨密度显着高于低钙对照组,无论是病理(骨组织学还是钙沉积)均优于低钙对照组;


如果满足以上要求,则可以确定受试物具有“有助于增加骨密度的功能”的作用。


3.2 方案二:


受试物试验组股骨骨钙含量或骨密度明显高于模型对照组,骨组织形态学指标较去势模型对照组有明显改善。只有这样才能确定受试物质具有“有助于增加骨密度的功能”的作用。