慢病毒包装：公司使用3质粒慢病毒包装系统，慢病毒系统使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G，过表达慢病毒系统使用pLVX-AcGFP、psPAX2、pMD2.G三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中，培养48h后，收集上清。使用genecopoeia公司慢病毒颗粒纯化试剂盒将慢病毒纯化。纯化后留取部分检测病毒滴度，其余病毒冻存于-80℃冰箱中。

滴度检测：将病毒颗粒使用梯度稀释，分别感染293T细胞，感染72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算病毒滴度。

细胞感染：在病毒感染前一天对细胞进行计数，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后使用无血清培养基稀释病毒，加入12孔板中对细胞进行感染，病毒数量根据推荐细胞的感染MOI加入（若无推荐MOI，需做病毒梯度：1,5,10,50,100 5个梯度对细胞感染），感染6h后去除含病毒溶液，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量PCR和Western blot检测目的基因的稳定表达情况。

实验流程：慢病毒质粒构建-HEK293T细胞培养-质粒转染293T细胞-病毒收集-病毒纯化-病毒滴度检测-细胞感染-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定

结果示例：

图 A 病毒滴度检测；B 目的细胞病毒感染效果图