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细胞运动能力检测



 

细胞运动能力
细胞运动具有粘附性和趋向性。当细胞受到外界刺激时,细胞内的粘附趋化因子激活,根据刺激性质做出不同的反应,细胞在骨架蛋白的作用下细胞伸出伪足,会在支撑物上反复的粘附和脱离,向刺激点或者远离刺激点运动。不同的刺激条件下会有不同的反应,根据细胞对不同刺激的反应,一般使用细胞划痕实验、细胞迁移能力实验、细胞侵袭能力实验检测细胞的运动能力。
 
细胞划痕实验是体外模拟细胞迁移能力和修复能力快捷的检测方法。
实验流程:
1.1、在六孔板中待细胞长满后,使用移液器枪头或其他硬物在六孔板中划1-3条平行的直线,加入PBS轻轻摇晃,去除PBS,重复使用PBS洗5次,以去除划出的细胞;
1.2、细胞分别培养0h、12h、24h后,观察细胞往中线迁移情况,同时使用ImageJ软件对划痕的距离进行检测,以判断细胞迁移能力。
悬浮细胞不适宜做细胞划痕实验。

细胞迁移和侵袭

实验是体外模拟肿瘤细胞迁移和侵袭能力的检测方法。使用不同孔径的聚碳酸酯膜transwell小室放入培养板中,将肿瘤细胞接种于小室中,利用培养液成分的差异诱导细胞运动,检测细胞的迁移和侵袭能力的差异。
实验流程
1 细胞迁移:
1.1、细胞经不同刺激后,去除细胞培养基,加入PBS洗一次,去除PBS,加入胰酶将细胞消化后将细胞转移至离心管中,1000rpm常温离心5min;
1.2、使用无血清培养基将细胞重悬,使用血球计数板对细胞计数,接种5×104个细胞于transwell小室上室,下室加入10%含血清的培养基,轻轻混匀后放入培养箱中培养8h;
1.3、去除上室和下室中的培养基,使用4%多聚甲醛或者乙醇常温固定细胞10min;
1.4、加入PBS洗2次,加入结晶紫染色液,常温染色20min,使用棉签轻轻擦拭以去除未迁移的细胞,加入水或者PBS洗两次,去除残留的染色液;
1.5、将transwell小室放在显微镜下拍照。
2 细胞侵袭
2.1、将matrigel放入4℃冰箱融化过夜,加入预冷的PBS,1:3比例将matrigel稀释,使用预冷的移液器将matrigel加入transwell小室上室中,轻轻加入防止出现气泡,加好后,将transwell小室放入细胞培养箱中凝固30min;
2.2、细胞经不同刺激后,去除细胞培养基,加入PBS洗一次,去除PBS,加入胰酶将细胞消化后将细胞转移至离心管中,1000rpm常温离心5min;
2.3、使用无血清培养基将细胞重悬,使用血球计数板对细胞计数,接种1×105个细胞于transwell小室上室,下室加入10%含血清的培养基,轻轻混匀后放入培养箱中培养24h;
2.4、去除上室和下室中的培养基,使用4%多聚甲醛或者乙醇常温固定细胞10min;
2.5、加入PBS洗2次,加入结晶紫染色液,常温染色20min,使用棉签轻轻擦拭以去除未迁移的细胞和残留的matrigel,加入水或者PBS洗两次,去除残留的染色液;
2.6、将transwell小室放在显微镜下拍照。





结果示例:

A 细胞划痕实验图;BC 胞迁移和侵袭实验图