RT-PCR:反转录baiPCR,是聚合酶链式反应的一种广泛应用的变形。 QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物,使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。 real-time PCR:实时PCR属于定量PCR的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。这两种RT PCR的组合又被称之为定量RT-PCR。
ROS也就是活性氧指来源于氧的自由基和非自由基。ROS在细胞生命,应激和死亡中具介导作用,并且不同浓度的ROS在其中起着截然不同的作用,从而导致细胞命运的不同。因此对ROS的浓度或相对水平进行可靠的测量非常有必要。
目的研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。裂解不完全会降低最后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。在清洗和裂解细胞时最好在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。
RNA干扰是一种利用小RNA发夹结构来抑制基因表达的有效方法,在生物医学研究中取得了重大进展,特别是在通过干扰基因功能来解析基因型-表型关系方面。但二者也有许多不同之处,比如miRNA是单链小RNA,通过抑制翻译而不是影响转录稳定性来调节基因表达,而siRNA是双链小RNA,通过在转录后水平上降解靶mRNA来调节基因表达等。
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。
RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物。