外泌体粒径分析、浓度检测外泌体粒径分析方法为纳米颗粒跟踪分析,其原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析,结合 Stockes-Einstein 方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NT A技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式,NT A技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。
荧光素酶报告实验由于其快捷、廉价、灵敏度高和可定量等优点,已普遍用于细胞生物学的研究,如基因表达转录水平的研究。下面以报告基因实验(启动子)为例,来介绍双荧光素酶报告系统。整个报告基因的核心是将待定的调控元件与报告基因进行融合,检测报告基因的表达。荧光素酶报告实验流程
ChIP 与其它方法结合,扩大了其应用范围。ChIP是一种稳定,可靠,应用十分普遍的鉴定活细胞内蛋白质-DNA相互作用的方法,不仅适用于基因组上特定位点的检测,也适用于全基因组范围的描述,还可以用于大量样本的高通量检测。
在活细胞内使用甲醛将DNA和蛋白交联,使用超声将染色质切成很小的片断,并沉淀下来。通过目的蛋白的抗体将蛋白免疫共沉淀,富集。通过定量PCR检测使用特异性引物对蛋白可能结合的DNA进行扩增检测。B ChIP检测结果分析示例图。
细胞免疫荧光染色是以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术。在细胞中,通过特定抗体的标记,可以检测目的蛋白表达量和表达定位。是细胞中最常用的可直观观察细胞内蛋白定位和表达的实验方法。
按照 1 比 4 的比例在 1X PBS 中稀释,制成 4% 甲醛溶液。00003.封闭缓冲液::准备 10 ml 缓冲液,添加 0.5 ml 与二抗同一物种来源的正常血清并混匀。搅拌时加入 30 l Triton X-100。00002.封闭标本时,按照数据表中推荐的稀释比例,在抗体稀释缓冲液中配制一抗。00007.00008.用抗体稀释缓冲液将荧光物质标记的二抗稀释后,室温下避光孵育标本 1–2 小时。